Cuantificación de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma
Introducción a las cámaras de recuento
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Cualquier experimento o estudio en el que se trabaje con células requiere que estas células estén en cantidades conocidas y adecuadas.
Para cuantificar las células de una suspensión celular existen distintos métodos. A pesar de los grandes avances en la ciencia,
aún hoy en día uno de los métodos más utilizados por su sencillez y bajo coste, es la observación microscópica directa
y el recuento de células en cámaras de recuento celular o hemocitómetros.
Existen muchas cámaras de recuento diferentes pero el funcionamiento básico es común en todos los casos.
Son portaobjetos especiales en los que está delimitada una trama de superficie conocida y sobre la que puede ubicarse un volumen fijo
de la suspensión celular en estudio. Al contar al microscopio las células contenidas en ese volumen determinado podemos estimar
la concentración de la muestra. Aunque esas tramas pueden ser muy variadas (puede estar subdividida de diversas formas), habitualmente
delimitan una superficie cuadrada de 1 mm de lado, es decir, 1 mm2. Al colocar la muestra en estudio en la
cámara de recuento y estando
el cubreobjetos en su posición adecuada, la muestra alcanza en la mayoría de los modelos una altura de 0,1 mm. De esta forma,
contabilizando las células contenidas en el entramado destinado al recuento se estiman las células que hay en 0,1 microlitros
(1 mm2 x 0,1 mm = 0,1 µl = 10-4 ml).
Si en lugar de contar la totalidad de los cuadros que conforman la superficie de 1 mm2 se decidiese contar un número menor
(por ejemplo cuando el número de células en cada uno de los cuadros fuese muy alto), los cuadros que se cuenten no han de estar
contiguos (habitualmente se cuentan los cuadros en los extremos y algunos de los cuadros en el centro de la trama), y habrá que hacer una
extrapolación para estimar el número de células en el total de la superficie de 1 mm2.
Información específica sobre cámara de recuento Neubauer improved
Información específica sobre cámara de recuento Thoma
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Nota para el docente
Si se quiere utilizar este servicio con fines docentes proponemos el siguiente procedimiento:
- Proporcionar al alumno la URL de esta página.
- Indicar al alumno que cuente las levaduras en la cámara de recuento que considere oportuna y
que resuelva los problemas propuestos.
- En caso de que el docente quiera controlar esta actividad, puede indicar al alumno que introduzca un número de 8 cifras concreto
(por ejemplo el número de Documento Nacional de Identidad, o cualquier otro número personal), que resuelva el ejercicio y
que se lo entregue para su corrección.
El docente podrá acceder a los problemas resueltos aquí.
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PROBLEMA NÚMERO 30016656 Mostrar otro problema
Se recomienda leer toda la página antes de proceder a resolver el problema.
A partir de una suspensión de levaduras se han realizado dos diluciones decimales hasta llegar a la
dilución 10-2. Diez microlitros de la dilución han sido transferidos
a una cámara de recuento Neubauer improved y otros diez a una cámara de recuento Thoma.
Hay que contabilizar las levaduras y hacer los cálculos para obtener la concentración de
levaduras en la suspensión inicial, e indicar cómo se obtendrían las siguientes diluciones de microorganismos:
- Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.
- Una suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.
Para contar las células hay que hacer click en la cámara de recuento (Neubauer o Thoma) que se desee utilizar.
+info
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Se abrirá una nueva ventana con una imagen que simula la cámara de recuento seleccionada y que es sustancialmente más grande que la pantalla.
Es probable que el navegador muestre la imagen ajustada al tamaño de la ventana del navegador, por lo que la resolución
de la imagen en la pantalla será muy mala. En este caso, haga click sobre la imagen para verla a tamaño real.
Se debe localizar la zona en la que hay que contar las levaduras y utilizar las barras de desplazamiento para navegar
por la superficie de la cámara de recuento. Este proceso se asemeja a la observación microscopica de la cámara de recuento
con el objetivo 40X, y se pretende que su uso on line permita familiarizarse con la cámara que
posteriormente se va a utilizar en el laboratorio.
Se deben contar todas las levaduras presentes en la zona central de la cámara de recuento (25 cuadrados medianos para Neubauer improved
o 16 cuadrados medianos para Thoma). Las dos cámaras de recuento darán lugar a un mismo resultado para un ejercicio concreto.
A continuación, calcular la concentración de la suspensión de levaduras sin diluir y
hacer los cálculos necesarios para resolver las preguntas propuestas.
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Cámara de recuento: Neubauer improved
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Cámara de recuento: Thoma
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Dilución: 10-2
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